针对鱼类雌性生殖干细胞难以长期培养、死亡个体种质难以利用等行业难题，中国水产科学研究院北戴河中心实验站科研团队开展了持续数年的攻关，近日取得了两项标志性科研成果：成功建立了长期传代的牙鲆卵原干细胞系，挖掘到调控卵原干细胞长期传代的关键分子；攻克了死亡牙鲆种质保存关键技术，实现了死亡雌鱼重要种质抢救利用。上述成果为海水鱼类雌性种质资源保护提供关键技术支撑。

一、研发专属培养体系，实现牙鲆卵原干细胞长期可控培养

鱼类精原干细胞系已有成功构建案例，但是鱼类卵原干细胞长期传代培养一直是领域技术难题。与精原干细胞相比，鱼类卵原干细胞在体外培养中对外源性营养因子要求严苛，极易发生自发分化或凋亡，分子调控网络复杂，建系难度高，制约了雌性生殖干细胞种质库的建设。

团队在前期牙鲆卵原干细胞高效分离纯化技术基础上（国家发明专利 ZL 201810283741.3），获得高纯度、高活性卵原干细胞，并为攻克体外长期培养难题，研发了L15SP专属的培养体系（国家发明专利ZL 202210482138.4）。该体系结合牙鲆卵原干细胞体外生长特征，精准调整培养液营养配比，采用差速贴壁法高效剔除了卵巢体细胞，成功构建了多株牙鲆核心种质的卵原干细胞系（PoOSCs），最长的一株细胞系实现连续传代288代、体外培养6年。

依托构建的PoOSCs实验材料，团队首次揭示了干扰素诱导跨膜蛋白3（Ifitm3）是维持牙鲆卵原干细胞体外稳态的关键分子，可正向调控卵原干细胞的增殖、迁移与干性稳定，为优化体外培养体系提供了分子调控靶点，有效推动卵原干细胞培养技术从“简单养活”向“精准调控、高效保活”跨越。

相关成果以“Ifitm3 positively regulates homeostasis of long-term cultured oogonial stem cells derived from Paralichthys olivaceus”为题发表于国际生殖生物学权威期刊《Biology of Reproduction》（JCR Q2 区，IF=3.2），任玉芹副研究员为第一作者，侯吉伦研究员为共同通讯作者。

二、攻克死亡种质保存关键技术，实现牙鲆雌鱼种质抢救利用

水产养殖与野生资源保护过程中，良种亲鱼与野生个体时常发生意外死亡，死亡个体种质如何留存，是亟待破解的难题。

研究团队围绕如何有效分离培养活的死亡牙鲆卵原干细胞开展雌鱼种质保存与抢救利用研究，首先明确了死亡牙鲆雌鱼种质抢救的有效时间窗口期：牙鲆死亡后，19℃下可保存15小时，4℃低温条件下可保存24小时。窗口期内可分离获得活性完好的卵原干细胞，并成功实现体外培养细胞系的建立和保存。通过转录组-代谢组多组学联合分析，阐明了铁死亡通路是卵原干细胞失活凋亡的核心通路，并筛选出vdac2、p53、slc7a11 等关键基因以及肾上腺酸、花生四烯酸等代谢物，可作为卵原干细胞活性评估生物标志物，最终形成了样本采集、活细胞分离到体外培养保存的完整技术流程。该成果为珍稀濒危鱼类和突发死亡优质种质资源抢救性保存提供了科学依据与可落地技术方案，大幅提升了水产种质资源的保存利用率。

相关成果以“Multi-omics investigation into why viable oogonial stem cells can still be isolated and cultured from post-mortem Paralichthys olivaceus”发表于《International Journal of Molecular Sciences》（JCR Q1 区，IF=5.6），任玉芹副研究员和杨雨聪研究实习员并列第一作者，侯吉伦研究员为共同通讯作者。

上述研究成果得到了中国水产科学研究院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金（2022XT0304, 2023TD41）、国家重点研发计划（2022YFD2400404）、国家自然科学基金（32302994）、国家海水鱼体系（CARS-46）、国家海洋水产种质资源库、河北省科技计划（262N6701D）、河北省现代农业产业技术体系（HBCT2024290202）等项目的资助。